ਅਣੂ ਨਿਦਾਨ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਅਤੇ ਸਿਧਾਂਤ

ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ, ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਚੇਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਦੇ ਅਧੀਨ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ dNTP, Mg2+, ਵਿਸਤਾਰ ਕਾਰਕ ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਵਧਾਉਣ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦਿੰਦੀ ਹੈ, ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਮੂਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਿੰਦੂ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਸ, ਡੀਨੈਚੁਰੇਸ਼ਨ, ਐਨੀਲਿੰਗ, ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ, ਆਦਿ ਦੇ ਕਦਮਾਂ ਰਾਹੀਂ, ਪੇਰੈਂਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਪੂਰਕ ਧੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਕਿਸੇ ਵੀ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।

1. ਹਾਟ ਸਟਾਰਟ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿੱਚ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦਾ ਸਮਾਂ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਵਿੱਚ ਪਾਉਣਾ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣਾ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਸਿਸਟਮ ਸੰਰਚਨਾ ਪੂਰੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਪੀਸੀਆਰ ਇਸ ਸਮੱਸਿਆ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਹਾਟ ਸਟਾਰਟ ਪੀਸੀਆਰ ਕੀ ਹੈ?ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੇ ਤਿਆਰ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮੋਡੀਫਾਇਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਹੀਟਿੰਗ ਪੜਾਅ ਜਾਂ "ਹੌਟ ਸਟਾਰਟ" ਪੜਾਅ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 90 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੋਂ ਵੱਧ) 'ਤੇ ਛੱਡਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੋ ਸਕੇ।ਸਹੀ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਅਤੇ ਤਾਪਮਾਨ DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਅਤੇ ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਮੋਡੀਫਾਇਰ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਵਿਧੀ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼, ਐਫੀਨਿਟੀ ਲਿਗੈਂਡਸ, ਜਾਂ ਕੈਮੀਕਲ ਮੋਡੀਫਾਇਰ ਵਰਗੇ ਸੋਧਕਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਕਿਉਂਕਿ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਰੋਕਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਗਰਮ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਕੁਰਬਾਨ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਮਲਟੀਪਲ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਸਹੂਲਤ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ।

2. RT-PCR

RT-PCR (ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪੀਸੀਆਰ) mRNA ਤੋਂ cDNA ਵਿੱਚ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਲਈ ਇੱਕ ਨਮੂਨੇ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਪਹਿਲਾਂ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਜਾਂ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ RNA ਨੂੰ ਕੱਢਣਾ ਹੈ, ਓਲੀਗੋ (dT) ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣਾ ਹੈ, cDNA ਨੂੰ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਜੀਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਜਾਂ ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ PCR ਪ੍ਰਸਾਰ ਲਈ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਜੋਂ cDNA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਹੈ।

3. ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ (ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ,RT-qPCR) ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਮੂਹਾਂ ਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਜੋੜਨ ਦੇ ਢੰਗ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਅਸਲ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਸਮੁੱਚੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲਾਂ ਦੇ ਸੰਚਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦਾ ਗਿਣਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ qPCR ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ SYBR ਗ੍ਰੀਨ I ਅਤੇ TaqMan ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।

4. ਨੇਸਟਡ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਨੇਸਟਡ ਪੀਸੀਆਰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਦੋ ਦੌਰ ਲਈ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਦੋ ਸੈੱਟਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਦੂਜੇ ਦੌਰ ਦਾ ਐਮਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਟੀਚਾ ਜੀਨ ਟੁਕੜਾ ਹੈ।

ਜੇਕਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਪਹਿਲੀ ਜੋੜੀ (ਬਾਹਰੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ) ਦੀ ਇੱਕ ਬੇਮੇਲਤਾ ਇੱਕ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਉਸੇ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਖੇਤਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਦੂਜੇ ਜੋੜੇ ਦੁਆਰਾ ਪਛਾਣੇ ਜਾਣ ਅਤੇ ਵਧਾਉਣਾ ਜਾਰੀ ਰੱਖਣ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਦੂਜੀ ਜੋੜੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਸਾਰਣ, ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਦੋ ਦੌਰ ਕਰਨ ਦਾ ਇੱਕ ਫਾਇਦਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਸੀਮਤ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਡੀਐਨਏ ਤੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ।

5. ਟੱਚਡਾਊਨ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਟੱਚਡਾਉਨ ਪੀਸੀਆਰ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ ਦੇ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਨੂੰ ਐਡਜਸਟ ਕਰਕੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਦਾ ਇੱਕ ਤਰੀਕਾ ਹੈ।

ਟੱਚਡਾਉਨ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿੱਚ, ਪਹਿਲੇ ਕੁਝ ਚੱਕਰਾਂ ਲਈ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਅਧਿਕਤਮ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ (ਟੀਐਮ) ਤੋਂ ਕੁਝ ਡਿਗਰੀ ਉੱਪਰ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਉੱਚ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਉਸੇ ਸਮੇਂ, ਉੱਚ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੇ ਵਿਛੋੜੇ ਨੂੰ ਵਧਾਏਗਾ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਉਪਜ ਘਟਦੀ ਹੈ।ਇਸਲਈ, ਪਹਿਲੇ ਕੁਝ ਚੱਕਰਾਂ ਵਿੱਚ, ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀ ਚੱਕਰ 1°C ਘੱਟ ਕਰਨ ਲਈ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਸਰਵੋਤਮ ਤਾਪਮਾਨ ਤੱਕ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਬਾਕੀ ਚੱਕਰਾਂ ਲਈ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

6. ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਨਮੂਨੇ ਤੋਂ ਸਿੱਧੇ ਟੀਚੇ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਸਿੱਧੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀਆਂ ਦੋ ਕਿਸਮਾਂ ਹਨ:

ਸਿੱਧੀ ਵਿਧੀ: ਥੋੜ੍ਹੇ ਜਿਹੇ ਨਮੂਨੇ ਲਓ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪਛਾਣ ਲਈ ਇਸਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਪੀਸੀਆਰ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ;

ਕਰੈਕਿੰਗ ਵਿਧੀ: ਨਮੂਨਾ ਲੈਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਸਨੂੰ ਲਾਈਸੇਟ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਛੱਡਣ ਲਈ ਲਾਈਜ਼ ਕਰੋ, ਥੋੜੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਲਾਈਜ਼ਡ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਲਓ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਪੀਸੀਆਰ ਪਛਾਣ ਕਰੋ।ਇਹ ਪਹੁੰਚ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਵਰਕਫਲੋ ਨੂੰ ਸਰਲ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੇ ਕਦਮਾਂ ਦੌਰਾਨ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਤੋਂ ਬਚਦੀ ਹੈ।

7. SOE PCR

ਓਵਰਲੈਪ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪੀਸੀਆਰ (SOE PCR) ਦੁਆਰਾ ਜੀਨ ਸਪਲੀਸਿੰਗ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਚੇਨਾਂ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਪੂਰਕ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਅਗਲੀ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ, ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਚੇਨਾਂ ਦੇ ਵਿਸਤਾਰ ਦੁਆਰਾ, ਇੱਕ ਤਕਨੀਕ ਦੇ ਵੱਖੋ-ਵੱਖ ਸਰੋਤ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਟੁਕੜੇ ਓਵਰਲੈਪ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਅਤੇ ਇਕੱਠੇ ਵੰਡੇ.ਇਸ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਦੋ ਮੁੱਖ ਕਾਰਜ ਦਿਸ਼ਾਵਾਂ ਹਨ: ਫਿਊਜ਼ਨ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਨਿਰਮਾਣ;ਜੀਨ ਸਾਈਟ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਪਰਿਵਰਤਨ.

8. ਆਈ.ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਇਨਵਰਸ ਪੀਸੀਆਰ (ਆਈਪੀਸੀਆਰ) ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਹੋਰ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਰਿਵਰਸ ਪੂਰਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਦੋਵੇਂ ਪਾਸੇ ਅਣਜਾਣ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ।

IPCR ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਆਸ ਪਾਸ ਦੇ ਅਣਜਾਣ ਖੇਤਰਾਂ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਜਿਆਦਾਤਰ ਜੀਨ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਕ੍ਰਮ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;ਓਨਕੋਜੇਨਿਕ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮਲ ਪੁਨਰ-ਵਿਵਸਥਾ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਜੀਨ ਫਿਊਜ਼ਨ, ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਪੋਜ਼ੀਸ਼ਨ;ਅਤੇ ਵਾਇਰਲ ਜੀਨ ਏਕੀਕਰਣ, ਹੁਣ ਵੀ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਸਾਈਟ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਮਿਊਟਜੇਨੇਸਿਸ ਲਈ, ਲੋੜੀਂਦੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰੋ।

9. dPCR

ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ (ਡੀਪੀਸੀਆਰ) ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾ ਲਈ ਇੱਕ ਤਕਨੀਕ ਹੈ।

ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਤਿੰਨ ਤਰੀਕੇ ਹਨ।ਫੋਟੋਮੈਟਰੀ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਅਣੂਆਂ ਦੇ ਸੋਖਣ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ;ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR (ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ) Ct ਮੁੱਲ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ, ਅਤੇ Ct ਮੁੱਲ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਮੁੱਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਖੋਜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ;ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਗਿਣਨ ਲਈ ਸਿੰਗਲ-ਮੌਲੀਕਿਊਲ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿਧੀ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਨਵੀਨਤਮ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਧੀ ਹੈ।