ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਅਤੇ ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ
1) ਇੱਕ ਢੁਕਵੀਂ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਚੁਣੋ।ਨੋਟ ਕਰੋ ਕਿ UF ਝਿੱਲੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰਸਾਇਣਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਆਪਣੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਦੇ ਪੱਧਰ ਵਿੱਚ ਭਿੰਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 10 kDa ਦੇ ਅਣੂ ਭਾਰ ਕੱਟ-ਆਫ ਵਾਲੀਆਂ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਣੂ ਭਾਰ ਕੱਟ-ਆਫ ਨਾਲ ਚੁਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਅਣੂ ਭਾਰ ਦੇ 1/3 ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ 35 kDa।ਜੇਕਰ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਅਣੂ ਭਾਰ ਲਗਭਗ 10 kd ਹੈ, ਤਾਂ 3 KD ਦੇ ਅਣੂ ਭਾਰ ਕੱਟ-ਆਫ ਵਾਲੀ ਇੱਕ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਰਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
(2) ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ, ਤਾਜ਼ੇ ਖਰੀਦੀ ਗਈ, ਸੁੱਕੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਅਲਟਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਪਾਣੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਝਿੱਲੀ, ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਜਾਂ ਫਰਿੱਜ ਵਿੱਚੋਂ ਕੁਝ ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਠੰਢਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਫਿਰ ਪਾਣੀ ਡੋਲ੍ਹਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਭਾਵ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਤਰਲ, ਅਤੇ ਕਿੰਨਾ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਵੀ ਟਿਊਬ ਦੇ ਸਿਖਰ 'ਤੇ ਚਿੱਟੀ ਲਾਈਨ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਾ ਹੋਵੇ।ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਹਲਕਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਘੋਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਠੰਢਾ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
3) ਗਰੈਵਿਟੀ ਦਾ ਪੁੰਜ ਅਤੇ ਕੇਂਦਰ ਦੋਵੇਂ ਸੰਤੁਲਨ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣੇ ਸਨ।ਨੋਟ ਕਰੋ ਕਿ ਰੋਟੇਸ਼ਨਲ ਸਪੀਡ ਅਤੇ ਪ੍ਰਵੇਗ ਬਹੁਤ ਤੇਜ਼ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗਲ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਸ਼ੁਰੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (4 ਡਿਗਰੀ ਤੱਕ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਪ੍ਰੀਕੂਲਡ)।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜਾਂ ਦੇ RPM ਨੂੰ g ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਵੱਖਰਾ ਸੀ।ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਦੀ ਪ੍ਰਵੇਗ ਨੂੰ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਝਿੱਲੀ 'ਤੇ ਦਬਾਅ ਘਟਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਨੋਟ ਕਰੋ, ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਦੇ ਆਪਣੀ ਮੰਜ਼ਿਲ ਦੀ ਗਤੀ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਨੂੰ ਛੱਡਣਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ, ਜਾਂ ਜੇਕਰ ਤੁਹਾਨੂੰ ਕੋਈ ਸਮੱਸਿਆ ਹੈ, ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਪਹਿਲੀ ਵਾਰ ਇਸ ਨੂੰ ਸੰਭਾਲ ਨਹੀਂ ਸਕਦੇ।ਸਪਿੰਡਲ ਲਈ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਐਂਗੁਲਰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੇਸ ਝਿੱਲੀ ਤੋਂ ਧੁਰੀ ਲੰਬਕਾਰੀ ਹੈ)।ਵਿਹਾਰਕ ਵਰਤੋਂ ਵਿੱਚ, ਆਮ ਰੋਟੇਸ਼ਨ ਦੀ ਗਤੀ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਦਾ ਜੀਵਨ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।
3) ਗਰੈਵਿਟੀ ਦਾ ਪੁੰਜ ਅਤੇ ਕੇਂਦਰ ਦੋਵੇਂ ਸੰਤੁਲਨ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣੇ ਸਨ।ਨੋਟ ਕਰੋ ਕਿ ਰੋਟੇਸ਼ਨਲ ਸਪੀਡ ਅਤੇ ਪ੍ਰਵੇਗ ਬਹੁਤ ਤੇਜ਼ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗਲ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਸ਼ੁਰੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (4 ਡਿਗਰੀ ਤੱਕ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਪ੍ਰੀਕੂਲਡ)।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜਾਂ ਦੇ RPM ਨੂੰ g ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਵੱਖਰਾ ਸੀ।ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਦੀ ਪ੍ਰਵੇਗ ਨੂੰ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਝਿੱਲੀ 'ਤੇ ਦਬਾਅ ਘਟਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਨੋਟ ਕਰੋ, ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਦੇ ਆਪਣੀ ਮੰਜ਼ਿਲ ਦੀ ਗਤੀ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਨੂੰ ਛੱਡਣਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ, ਜਾਂ ਜੇਕਰ ਤੁਹਾਨੂੰ ਕੋਈ ਸਮੱਸਿਆ ਹੈ, ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਪਹਿਲੀ ਵਾਰ ਇਸ ਨੂੰ ਸੰਭਾਲ ਨਹੀਂ ਸਕਦੇ।ਸਪਿੰਡਲ ਲਈ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਐਂਗੁਲਰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੇਸ ਝਿੱਲੀ ਤੋਂ ਧੁਰੀ ਲੰਬਕਾਰੀ ਹੈ)।ਵਿਹਾਰਕ ਵਰਤੋਂ ਵਿੱਚ, ਆਮ ਰੋਟੇਸ਼ਨ ਦੀ ਗਤੀ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਦਾ ਜੀਵਨ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।
(4) ਜਦੋਂ ਬਾਕੀ ਬਚੇ 1ml ਤੱਕ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ 50ul ਬਫਰ ਘੋਲ ਲਓ, 10ul ਦਾ ਪ੍ਰਵਾਹ ਪਾਓ ਅਤੇ ਦੇਖੋ ਕਿ ਕੀ ਕੋਈ ਨੀਲਾ ਰੰਗ ਹੈ, ਇਹ ਨਿਰਣਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਟਿਊਬ ਲੀਕੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਉੱਪਰਲੀ ਪਰਤ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਡੋਲ੍ਹ ਦਿਓ ਅਤੇ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਵਹਾਓ।ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ ਟਿਊਬਾਂ ਖੁੰਝ ਗਈਆਂ ਸਨ, ਫਲੋਥਰੂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 5mgml BSA ਦੇ ਨਾਲ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਲੂ ਜਾਂ ਬ੍ਰੈਡਫੋਰਡ ਕੱਚੇ ਅਸੇ 'ਤੇ ਚੱਲਦੇ ਹੋਏ, ਅਤੇ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਸੰਘਣੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਘੋਲ (ਜੋ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਗਰਮ ਹੋਣ ਤੋਂ ਰੋਕਦਾ ਹੈ) ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਜਾਰੀ ਰੱਖੋ. ਸਾਰਾ ਧਿਆਨ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਧਿਆਨ ਰੱਖੋ ਜੇਕਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਵਰਖਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਵਰਖਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਵਰਖਾ ਦਾ ਖਾਸ ਕਾਰਨ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੈ ਜਾਂ ਇੱਕ ਅਣਉਚਿਤ ਬਫਰ ਹੈ;ਪਹਿਲੇ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਕਈ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬਾਂ ਦੇ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਘਟਾ ਕੇ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਾਲੇ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਫਰ ਹੱਲਾਂ ਦਾ ਆਦਾਨ-ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਕੇ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਕੋਈ ਵਰਖਾ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
(4) ਜਦੋਂ ਬਾਕੀ ਬਚੇ 1ml ਤੱਕ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ 50ul ਬਫਰ ਘੋਲ ਲਓ, 10ul ਦਾ ਪ੍ਰਵਾਹ ਪਾਓ ਅਤੇ ਦੇਖੋ ਕਿ ਕੀ ਕੋਈ ਨੀਲਾ ਰੰਗ ਹੈ, ਇਹ ਨਿਰਣਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਟਿਊਬ ਲੀਕੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਉੱਪਰਲੀ ਪਰਤ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਡੋਲ੍ਹ ਦਿਓ ਅਤੇ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਵਹਾਓ।ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ ਟਿਊਬਾਂ ਖੁੰਝ ਗਈਆਂ ਸਨ, ਫਲੋਥਰੂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 5mgml BSA ਦੇ ਨਾਲ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਲੂ ਜਾਂ ਬ੍ਰੈਡਫੋਰਡ ਕੱਚੇ ਅਸੇ 'ਤੇ ਚੱਲਦੇ ਹੋਏ, ਅਤੇ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਸੰਘਣੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਘੋਲ (ਜੋ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਗਰਮ ਹੋਣ ਤੋਂ ਰੋਕਦਾ ਹੈ) ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਜਾਰੀ ਰੱਖੋ. ਸਾਰਾ ਧਿਆਨ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਧਿਆਨ ਰੱਖੋ ਜੇਕਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਵਰਖਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਵਰਖਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਵਰਖਾ ਦਾ ਖਾਸ ਕਾਰਨ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੈ ਜਾਂ ਇੱਕ ਅਣਉਚਿਤ ਬਫਰ ਹੈ;ਪਹਿਲੇ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਕਈ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬਾਂ ਦੇ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਘਟਾ ਕੇ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਾਲੇ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਫਰ ਹੱਲਾਂ ਦਾ ਆਦਾਨ-ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਕੇ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਕੋਈ ਵਰਖਾ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
(5) ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਪਹਿਲੇ ਕੁਝ ਕਦਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਬਫਰ ਨੂੰ ਬਦਲਣਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਨਵਾਂ ਬਫਰ (0.22um ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਝਿੱਲੀ ਦੁਆਰਾ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ) ਕੁੱਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਲਗਭਗ 1ml ਵਿੱਚ ਜੋੜੋ, ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਲਈ ਲਗਭਗ 1ml ਤੱਕ ਮੁੜ ਕੇਂਦ੍ਰਿਤ ਕਰੋ। ਲਗਾਤਾਰ ਵਾਰ, ਲੋੜੀਂਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਅੰਤਮ ਸੰਘਣੇ ਅੰਤਮ ਵਾਲੀਅਮ ਦੇ ਨਾਲ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 500ul ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ, ਪਰ 200ul ਦੇ ਅੰਦਰ ਵੀ।ਤਿੰਨ ਮੌਕਿਆਂ 'ਤੇ 1000 × ਜਾਂ ਇਸ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ, ਜ਼ਰੂਰੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜਿੰਨੇ ਬਫਰ ਤਬਦੀਲੀ, ਹਰ ਵਾਰ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 10 × ਜਾਂ ਇਸ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਾਲੀਅਮ ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਦੁਆਰਾ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
(5) ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਪਹਿਲੇ ਕੁਝ ਕਦਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਬਫਰ ਨੂੰ ਬਦਲਣਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਨਵਾਂ ਬਫਰ (0.22um ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਝਿੱਲੀ ਦੁਆਰਾ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ) ਕੁੱਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਲਗਭਗ 1ml ਵਿੱਚ ਜੋੜੋ, ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਲਈ ਲਗਭਗ 1ml ਤੱਕ ਮੁੜ ਕੇਂਦ੍ਰਿਤ ਕਰੋ। ਲਗਾਤਾਰ ਵਾਰ, ਲੋੜੀਂਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਅੰਤਮ ਸੰਘਣੇ ਅੰਤਮ ਵਾਲੀਅਮ ਦੇ ਨਾਲ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 500ul ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ, ਪਰ 200ul ਦੇ ਅੰਦਰ ਵੀ।ਤਿੰਨ ਮੌਕਿਆਂ 'ਤੇ 1000 × ਜਾਂ ਇਸ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ, ਜ਼ਰੂਰੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜਿੰਨੇ ਬਫਰ ਤਬਦੀਲੀ, ਹਰ ਵਾਰ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 10 × ਜਾਂ ਇਸ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਾਲੀਅਮ ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਦੁਆਰਾ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਨਵੰਬਰ-09-2022